เปปไทด์ 3xflagเป็นลำดับเครื่องหมายเปปไทด์ที่สำคัญที่ใช้กันอย่างแพร่หลายในการแสดงออกของโปรตีนและกระบวนการทำให้บริสุทธิ์ในการวิจัยทางชีวการแพทย์ สูตรโมเลกุล C120H169N31O49S, CAS 402750-12-3 ประกอบด้วยกรดอะมิโน 23 ตัวลำดับของมันประกอบด้วยลวดลาย ASP Tyr Lys XAA XAA ASP ซ้ำสามครั้งซึ่งให้คุณสมบัติโครงสร้างที่เฉพาะเจาะจง มีความสามารถในการละลายที่ดีในตัวทำละลายเฉพาะ ตัวอย่างเช่นใน DMSO ความสามารถในการละลายของมันสูงทำให้สะดวกสำหรับการดำเนินงานและการทดลองในการแก้ปัญหา นอกจากนี้ยังสามารถบรรลุผลการละลายที่ดีในน้ำผ่านการให้ความร้อนเล็กน้อย นอกจากนี้ยังมีคุณสมบัติพิเศษบางอย่าง ตัวอย่างเช่นมันมีแอนติเจนและปฏิกิริยาที่ดีและสามารถผูกกับแอนติบอดีต่อต้านธงที่เฉพาะเจาะจง ความสามารถในการผูกมัดนี้ทำให้ใช้งานได้อย่างกว้างขวางในการทดลองเช่นการกระตุ้นภูมิคุ้มกัน โดยการแข่งขันที่มีผลผูกพันกับแอนติบอดีต่อต้านธงการฟิวชั่นธงแสดงโปรตีนที่ผูกกับแอนติบอดีต่อต้านธงสามารถชะลอในระหว่างการกระตุ้นภูมิคุ้มกันซึ่งจะทำให้การตรวจการตรวจจับและการทำให้บริสุทธิ์ของโปรตีนเป้าหมาย
|
ฝาขวดและไม้จุกที่กำหนดเอง:
|
|
|
สูตรเคมี |
C120H169N31O49S |
|
มวลที่แน่นอน |
2860 |
|
น้ำหนักโมเลกุล |
2862 |
|
m/z |
2861 (100.0%), 2860 (77.0%), 2862 (32.9%), 2862 (31.4%), 2863 (22.1%), 2862 (11.5%), 2863 (10.1%), 2861 (8.8%), 2864 (8.1%), 2862 (7.8%), 2863 (7.4%), 2863 (5.3%), 2863 (4.5%), 2862 (3.5%), 2864 (3.3%), 2864 (3.2%), 2865 (2.2%), 2865 (2.1%), 2864 (2.1%), 2862 (1.9%), 2862 (1.9%), 2861 (1.5%), 2864 (1.5%), 2861 (1.4%), 2864 (1.4%), 2863 (1.2%), 2864 (1.2%) |
|
การวิเคราะห์องค์ประกอบ |
C, 50.36; H, 5.95; N, 15.17; O, 27.39; S, 1.12 |
เปปไทด์ 3xflagเป็นแท็กที่ใช้ในการวิจัยโปรตีนซึ่งประกอบด้วยกรดอะมิโน 8 ตัวที่มีลำดับ dykdhdgdykdhdidykdddk หน้าที่หลักของมันคือการทำหน้าที่เป็นเครื่องหมายสำหรับการแสดงออกของโปรตีนและการทำให้บริสุทธิ์ซึ่งเป็นวิธีการวิจัยที่สะดวกและมีประสิทธิภาพ
1. การทำให้บริสุทธิ์ Affinity:
มันสามารถใช้เป็นฉลากสำหรับการทำให้บริสุทธิ์โปรตีนและผ่านความสัมพันธ์ที่สูงกับแอนติบอดีต่อต้านธงธงโปรตีนเป้าหมายสามารถทำให้บริสุทธิ์ได้ง่าย โดยปกติแล้วโปรตีนเป้าหมายจะถูกถ่าย CO เข้าสู่เซลล์ที่มีเวกเตอร์นิพจน์ที่มีเปปไทด์ธง 3x และจากนั้นทำให้บริสุทธิ์โดยความสัมพันธ์โดยใช้แอนติบอดีต่อต้านธงเพื่อให้ได้โปรตีนเป้าหมายความบริสุทธิ์สูงอย่างรวดเร็วและมีประสิทธิภาพ
2. การทดสอบทางภูมิคุ้มกัน:
เนื่องจากภูมิคุ้มกันสูงจึงสามารถใช้ในการตรวจจับการแสดงออกของโปรตีนและการแปล ด้วยการใช้แอนติบอดีต่อต้านธงที่เฉพาะเจาะจงเทคนิคการทดลองเช่นการย้อมอิมมูโนบล็อตและการย้อมสีอิมมูโนฟลูออเรสเซนต์สามารถดำเนินการได้อย่างรวดเร็วและแม่นยำในการตรวจจับระดับการแสดงออกและการกระจายของโปรตีนเป้าหมาย
3. การกรองโคลน:
นอกจากนี้ยังสามารถใช้เพื่อความสะดวกในการตรวจคัดกรองโปรตีนโคลน ในกระบวนการก่อสร้างของเวกเตอร์การแสดงออกของโปรตีนการเชื่อมต่อลำดับยีนของโปรตีนเป้าหมายกับเปปไทด์ 3xflagลำดับสามารถอำนวยความสะดวกในการคัดกรองโคลนนิ่งบวกด้วยโปรตีนเป้าหมายผ่านการตรวจจับภูมิคุ้มกันและวิธีการอื่น ๆ ซึ่งจะช่วยเร่งกระบวนการวิจัยการทำงานของโปรตีน
4. การสร้างภูมิคุ้มกัน:
นอกจากนี้ยังสามารถใช้สำหรับการทดลองอิมมูโนโปรตีนโปรตีน โดยการจับโปรตีนที่มีแท็กเปปไทด์ 3x Flag กับแอนติบอดีต่อต้านธงและจากนั้นใช้วัสดุการดูดซับเช่นโปรตีน A/G agarose หรือลูกปัดแม่เหล็กโปรตีนเป้าหมายและพันธมิตรที่มีปฏิสัมพันธ์สามารถคัดเลือกจากสารสกัดจากเซลล์เพื่อศึกษาเครือข่ายปฏิสัมพันธ์โปรตีน
5. การคัดกรองยา:
นอกจากนี้ยังสามารถใช้ในการวิจัยการคัดกรองยา ด้วยการรวมแท็กเปปไทด์ 3x Flag เข้ากับโปรตีนที่น่าสนใจการตรวจคัดกรองโปรตีนความเร็วสูงสามารถทำได้ วิธีการตรวจคัดกรองนี้สามารถใช้เพื่อค้นหาเป้าหมายยาใหม่ประเมินปฏิกิริยาของโปรตีนยาและอื่น ๆ
6. การวิจัยฟังก์ชั่นโปรตีน:
การแนะนำของฉลากไม่ส่งผลกระทบต่อโครงสร้างตามธรรมชาติและการทำงานของโปรตีนอย่างมีนัยสำคัญดังนั้นจึงสามารถนำมาใช้ในการศึกษาฟังก์ชั่นทางชีวภาพการแปลเซลล์ subcellular การโต้ตอบและการส่งสัญญาณของโปรตีน ด้วยการแนะนำแท็กเปปไทด์ 3x Flag การวิจัยเชิงลึกสามารถดำเนินการเกี่ยวกับลักษณะทางชีวภาพของโปรตีนซึ่งช่วยในการเปิดเผยกลไกการออกฤทธิ์ในชีววิทยาของเซลล์และสรีรวิทยา
เปปไทด์ 3xflagเป็นเปปไทด์ที่มีกรดอะมิโน 8 ตัวโดยมีลำดับ dykdhdgdykdhdidykdddk มันมักจะใช้เป็นแท็กโปรตีนสำหรับการทำให้บริสุทธิ์การตรวจจับและการวิจัยโปรตีนเป้าหมาย ในกระบวนการสังเคราะห์ทางชีวภาพสามารถเตรียมผ่านการสังเคราะห์เคมีหรือวิธีการทางพันธุวิศวกรรม ต่อไปนี้เป็นขั้นตอนโดยละเอียดของวิธีการทางพันธุวิศวกรรม:
1. การออกแบบและสังเคราะห์ยีน:
ประการแรกจำเป็นต้องออกแบบยีนเทียมที่มีลำดับเปปไทด์ 3x ยีนนี้ควรมีลำดับเปปไทด์ 3x Flag รวมถึงโปรโมเตอร์ที่เหมาะสมเทอร์มินัลและเครื่องหมายการเลือก (เช่นยีนที่ทนต่อยาปฏิชีวนะ) การออกแบบยีนควรพิจารณาถึงลักษณะและความต้องการการแสดงออกของโฮสต์เป้าหมาย
2. การโคลนนิ่งยีน:
ถัดไปยีนประดิษฐ์ที่ออกแบบมาจะถูกโคลนเป็นเวกเตอร์การแสดงออกที่เหมาะสม เวกเตอร์ที่ใช้กันทั่วไป ได้แก่ พลาสมิด, เวกเตอร์ไวรัส ฯลฯ กระบวนการโคลนนิ่งมักจะมีขั้นตอนต่อไปนี้:
-PCR Amplification: การใช้ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรส (PCR) เพื่อขยายลำดับยีนเป้าหมายจาก DNA เทมเพลต
-Digestion และการเชื่อมต่อ: ผลิตภัณฑ์ PCR จะถูกย่อยด้วยเวกเตอร์นิพจน์โดยใช้ endonucleases ข้อ จำกัด และจากนั้นเชื่อมต่อกันด้วย dNA ligases
-transformation: การเปลี่ยนเวกเตอร์นิพจน์ที่เชื่อมต่อเป็นโฮสต์แบคทีเรียเช่น Escherichia coli เพื่อสร้างพลาสมิด recombinant
-การระบุ: พลาสมิด recombinant ถูกระบุผ่าน PCR, การย่อยเอนไซม์, การจัดลำดับดีเอ็นเอและวิธีอื่น ๆ เพื่อยืนยันว่ายีนเป้าหมายได้รับการโคลนในเวกเตอร์สำเร็จ
3. โปรตีนเป้าหมายการแสดงออก:
transfect เวกเตอร์นิพจน์ที่สร้างขึ้นในเซลล์โฮสต์เป้าหมายเช่นเซลล์ของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมเซลล์ยีสต์เซลล์แมลง ฯลฯ ภายในเซลล์การแสดงออกของเวกเตอร์จะถูกถอดความเป็น mRNA จากนั้นแปลเป็นโปรตีน . 3 เปปไทด์ FLAG X จะแสดงร่วมกับโปรตีนเป้าหมายเป็นแท็กโปรตีน
4. การสกัดโปรตีน:
รวบรวมเซลล์ transfected และดำเนินการแยกส่วนของเซลล์การปั่นแยกและการรักษาอื่น ๆ เพื่อให้ได้สารสกัดโปรตีนทั้งหมด
5. โปรตีนบริสุทธิ์:
การใช้เทคนิคการทำให้บริสุทธิ์แบบ Affinity เช่น immunoprecipitation และ chromatography affinity โปรตีนเป้าหมายที่มีแท็กเปปไทด์ 3X ถูกทำให้บริสุทธิ์จากสารสกัดทั้งหมด สิ่งนี้มักจะเกี่ยวข้องกับแอนติบอดีต่อต้านธงกับโปรตีนที่มีเปปไทด์ธง 3x แล้วแยกออกโดยใช้คอลัมน์โครมาโตกราฟี Affinity หรือลูกปัดแม่เหล็ก
6. ระบุโปรตีน:
โปรตีนบริสุทธิ์ถูกระบุและวัดปริมาณโดย SDS-PAGE GEL electrophoresis, immunoblotting, mass spectrometry และเทคโนโลยีอื่น ๆ เพื่อให้แน่ใจว่ามีความบริสุทธิ์และความสมบูรณ์
อาการไม่พึงประสงค์
ในการวิจัยทางชีวการแพทย์และการทดลองที่เกี่ยวข้องกับโปรตีนแท็กเปปไทด์มีบทบาทสำคัญ พวกเขาสามารถช่วยเหลือนักวิจัยในการทำให้บริสุทธิ์ตรวจจับและค้นหาโปรตีนเป้าหมายส่งเสริมการพัฒนาวิทยาศาสตร์โปรตีนอย่างมากเปปไทด์ 3xflagเป็นเปปไทด์แท็กที่ใช้กันทั่วไปและใช้กันอย่างแพร่หลายซึ่งประกอบด้วยลำดับแท็กธงซ้ำสามลำดับ แท็กธงได้รับการออกแบบโดย Hopp และคณะ ในปี 1988 และต่อมาพัฒนาเป็นตัวแปรเช่น 3xFlag ซึ่งมีความสัมพันธ์สูงและความจำเพาะสูงและสามารถผูกกับแอนติบอดีที่เฉพาะเจาะจงได้อำนวยความสะดวกในการแยกและการระบุตัวตนที่ตามมา แม้ว่าเปปไทด์ 3xFlag ได้นำสิ่งอำนวยความสะดวกมากมายมาใช้ในการทดลองเช่นตัวแทนทางชีวภาพอื่น ๆ แต่ก็อาจทำให้เกิดอาการไม่พึงประสงค์บางอย่าง
อาการไม่พึงประสงค์ที่เกี่ยวข้องกับภูมิคุ้มกัน
การสร้างภูมิคุ้มกัน
ภูมิคุ้มกันหมายถึงความสามารถของสารในการกระตุ้นระบบภูมิคุ้มกันของร่างกายในการสร้างการตอบสนองของระบบภูมิคุ้มกัน . 3 เปปไทด์ XFLAG เป็นส่วนเปปไทด์ภายนอกอาจได้รับการยอมรับจากระบบภูมิคุ้มกันของร่างกาย แม้ว่าลำดับ 3xFlag นั้นค่อนข้างสั้น แต่ในบางกรณีมันอาจยังคงเปิดใช้งานเซลล์ B และเซลล์ T ซึ่งนำไปสู่การผลิตแอนติบอดี แอนติบอดีเหล่านี้ไม่เพียง แต่ผูกกับเปปไทด์ 3xFlag ฟรี แต่ยังอาจรับรู้และผูกกับโปรตีนฟิวชั่นที่แสดงแท็ก 3xFlag ซึ่งมีผลต่อการทำงานปกติและการกระจายของโปรตีนฟิวชั่น
อาการแพ้
ปฏิกิริยาการแพ้คือการตอบสนองของระบบภูมิคุ้มกันที่ผิดปกติที่เกิดจากระบบภูมิคุ้มกันที่ไวต่อสารก่อภูมิแพ้บางอย่างมากเกินไป บุคคลแต่ละคนอาจมีอาการแพ้เมื่อใช้เปปไทด์ 3xFlag สำหรับการทดลองหรือการรักษา ความรุนแรงของอาการของอาการแพ้แตกต่างกันไป กรณีที่ไม่รุนแรงอาจมีอาการในท้องถิ่นเช่นอาการคันผื่นและผื่นแดงในขณะที่กรณีที่รุนแรงอาจทำให้เกิดอาการแพ้อย่างเป็นระบบเช่นการช็อก anaphylactic ซึ่งมีความดันโลหิตลดลงอย่างรวดเร็วการหายใจลำบากและการสูญเสียสติ
อาการแพ้
กลไกของปฏิกิริยาการแพ้ส่วนใหญ่เกี่ยวข้องกับแอนติบอดี IgE ในระบบภูมิคุ้มกัน เมื่อร่างกายสัมผัสกับเปปไทด์ 3xflag เป็นครั้งแรกระบบภูมิคุ้มกันจะรับรู้ว่าเป็นสารก่อภูมิแพ้และกระตุ้นเซลล์ B เพื่อผลิตแอนติบอดี IgE เฉพาะ แอนติบอดี IgE เหล่านี้ติดกับพื้นผิวของเซลล์เสาและ eosinophils เมื่อร่างกายสัมผัสกับเปปไทด์ 3xflag อีกครั้งมันจะผูกกับแอนติบอดี IgE บนพื้นผิวเซลล์กระตุ้นเซลล์เสาและ eosinophils เพื่อปลดปล่อยผู้ไกล่เกลี่ยทางชีวภาพเช่นฮิสตามีนและ leukotrienes นำไปสู่การเกิดอาการแพ้
ความเสี่ยงของโรคแพ้ภูมิตัวเอง
การสัมผัสกับเปปไทด์ 3xflag ระยะยาวหรือซ้ำ ๆ อาจเพิ่มความเสี่ยงในการพัฒนาโรคแพ้ภูมิตัวเอง โรคแพ้ภูมิตัวเองอ้างถึงประเภทของโรคที่ระบบภูมิคุ้มกันของร่างกายโจมตีเนื้อเยื่อและอวัยวะของตัวเองอย่างไม่เหมาะสมทำให้เกิดความเสียหายของเนื้อเยื่อและการด้อยค่าของการทำงาน . 3 เปปไทด์ XFLAG เซลล์ภูมิคุ้มกันและแอนติบอดีเหล่านี้ไม่เพียง แต่โจมตีเปปไทด์ 3xflag ต่างประเทศ แต่ยังทำลายเนื้อเยื่อปกติของร่างกายโดยไม่ตั้งใจซึ่งนำไปสู่โรคภูมิต้านตนเอง ตัวอย่างเช่นโรคแพ้ภูมิตัวเองบางชนิดเช่นโรคลูปัส erythematosus และโรคไขข้ออักเสบอาจเกี่ยวข้องกับปฏิกิริยาแพ้ภูมิตัวเองที่เกิดจากสารภายนอก แม้ว่าในปัจจุบันไม่มีหลักฐานที่ชัดเจนที่จะชี้ให้เห็นว่าเปปไทด์ 3xFlag ทำให้เกิดโรคแพ้ภูมิตัวเองโดยตรง แต่ความเสี่ยงที่อาจเกิดขึ้นนี้ไม่สามารถเพิกเฉยได้
ผลกระทบต่อการทำงานของเซลล์
ความเป็นพิษต่อเซลล์
ในการศึกษาเชิงทดลองบางครั้งพบว่าเปปไทด์ 3xflag ที่มีความเข้มข้นสูงอาจมีผลกระทบต่อเซลล์ที่เป็นพิษ อาการของความเป็นพิษต่อเซลล์รวมถึงการเปลี่ยนแปลงในสัณฐานวิทยาของเซลล์การหยุดชะงักของความสมบูรณ์ของเยื่อหุ้มเซลล์การเปลี่ยนแปลงในกิจกรรมของเอนไซม์ภายในเซลล์และการยับยั้งการเพิ่มจำนวนเซลล์ กลไกการออกฤทธิ์ของมันอาจเกี่ยวข้องกับการทำงานร่วมกันระหว่างเปปไทด์ 3xFlag และเยื่อหุ้มเซลล์ เนื่องจากประจุลบที่แข็งแกร่งของเปปไทด์ 3xflag มันอาจผูกกับส่วนประกอบที่มีประจุบวกบนเยื่อหุ้มเซลล์ผ่านปฏิสัมพันธ์ไฟฟ้าสถิตการเปลี่ยนแปลงการซึมผ่านและการไหลของเยื่อหุ้มเซลล์ซึ่งนำไปสู่การรั่วไหลของสารภายในเซลล์หรือการเข้าของสารอันตรายจากภายนอก นอกจากนี้เปปไทด์ 3xFlag อาจเข้าสู่การตกแต่งภายในของเซลล์แทรกแซงเส้นทางการส่งสัญญาณการสังเคราะห์โปรตีนและกระบวนการอื่น ๆ
ผลกระทบต่อเส้นทางการส่งสัญญาณของเซลล์
เปปไทด์ 3xFlag อาจรบกวนเส้นทางการส่งสัญญาณภายในเซลล์และส่งผลกระทบต่อกิจกรรมทางสรีรวิทยาปกติของเซลล์ เส้นทางการส่งสัญญาณของโทรศัพท์มือถือเป็นคำที่รวมกันสำหรับชุดของเหตุการณ์โมเลกุลที่เซลล์ตอบสนองต่อสิ่งเร้าภายนอกควบคุมกระบวนการที่สำคัญเช่นการเจริญเติบโตของเซลล์ความแตกต่างและการตายของเซลล์ . 3 เปปไทด์ xflag อาจรบกวนการส่งสัญญาณการส่งสัญญาณ ตัวอย่างเช่นมันอาจผูกกับตัวรับบนพื้นผิวของเซลล์การแข่งขันยับยั้งการจับของแกนด์ธรรมชาติกับตัวรับและการปิดกั้นการส่งสัญญาณ อีกทางเลือกหนึ่งสามารถเข้าสู่เซลล์และผูกกับโปรตีนการส่งสัญญาณส่งผลกระทบต่อโปรตีนฟอสโฟรีเลชั่น, dephosphorylation และกระบวนการปรับเปลี่ยนอื่น ๆ รบกวนการส่งสัญญาณและการขยายสัญญาณ การรบกวนนี้กับเส้นทางการส่งสัญญาณของเซลล์นี้อาจนำไปสู่ความผิดปกติของเซลล์ซึ่งส่งผลกระทบต่อกระบวนการต่าง ๆ เช่นการเพิ่มจำนวนเซลล์ความแตกต่างและการตายของเซลล์ซึ่งอาจมีผลเสียต่อการพัฒนาปกติและการทำงานของเนื้อเยื่อและอวัยวะ
ผลกระทบต่อการเผาผลาญของเซลล์
การเผาผลาญของเซลล์เป็นคำทั่วไปสำหรับชุดของปฏิกิริยาทางเคมีที่เกิดขึ้นภายในเซลล์การให้พลังงานและวัสดุพื้นฐานสำหรับกิจกรรมชีวิตของเซลล์ . 3 เปปไทด์ XFLAG อาจส่งผลต่อกระบวนการเผาผลาญของเซลล์รบกวนการผลิตพลังงานของเซลล์และการสังเคราะห์สาร ตัวอย่างเช่นมันอาจส่งผลกระทบต่อการทำงานของ mitochondria ซึ่งเป็นสถานที่หลักสำหรับการหายใจแบบแอโรบิคและการผลิตพลังงานในเซลล์ . 3 เปปไทด์ xflag อาจเปลี่ยนการซึมผ่านของเยื่อหุ้มเซลล์ยลและศักยภาพในการโต้ตอบกับการทำงานของโปรตีน นอกจากนี้เปปไทด์ 3xFlag อาจรบกวนกระบวนการภายในเซลล์เช่นการเผาผลาญกลูโคสและการเผาผลาญไขมันซึ่งส่งผลกระทบต่อความสมดุลของการสังเคราะห์สารและการสลายตัวในเซลล์และมีผลกระทบเชิงลบต่อการทำงานทางสรีรวิทยาปกติของเซลล์
มืออาชีพ
เรานำเสนอส่วนประกอบการส่งที่หลากหลายรวมถึงเฟือง, โซ่ลูกกลิ้ง, เกียร์, ข้อต่อ, ชั้นวาง, ฮับ, รอก, แขนเรียว, เบาะนั่งแบริ่งและอื่น ๆ
ป้ายกำกับยอดนิยม: 3xFlag Peptide CAS 402750-12-3, ซัพพลายเออร์, ผู้ผลิต, โรงงาน, ขายส่ง, ซื้อ, ราคา, จำนวนมาก, ขาย