, สูตรโมเลกุล C284H432N84Oอะโปรตินิน78R2S7, CAS 9087-70-1 เป็นสารยับยั้งโปรตีเอสที่สามารถยับยั้งทริปซินและไคโมทริปซิน ป้องกันการกระตุ้นการทำงานของโปรตีโอโซมที่ออกฤทธิ์อื่นๆ ในตับอ่อน และการกระตุ้นทริปซิโนเจนด้วยตนเอง ใช้ทางการแพทย์ในการป้องกันและรักษาโรคตับอ่อนอักเสบเฉียบพลัน เลือดออกที่เกิดจากการละลายลิ่มเลือด และการแข็งตัวของเลือดในหลอดเลือด นอกจากนี้ยังสามารถใช้เพื่อป้องกันการกระแทกได้ สารยับยั้งโปรตีเอสเป็นสารที่สามารถจับกับเอนไซม์และลดอัตราการย่อยสลายของสารตั้งต้น สารยับยั้งโปรตีเอสที่มีคุณสมบัติของโปรตีนมีอยู่อย่างกว้างขวาง และสารยับยั้งโปรตีเอสที่มีคุณสมบัติของโปรตีนสองประเภทได้ถูกแยกออกจากถั่วเหลือง: สารยับยั้ง Kuniz trypsin และสารยับยั้ง Baumann Bellck แบบแรกมีน้ำหนักโมเลกุล 20-25 ku ในขณะที่แบบหลังมีน้ำหนักโมเลกุล 8 ku
|
|
|
รีคอมบิแนนท์อะโปรตินิน(RTI16) สามารถยับยั้งไคนิเนสและทริปซิน และเป็นตัวยับยั้งซีรีนโปรตีเอสที่ไม่จำเพาะตามธรรมชาติ มันเป็นโปรตีนพื้นฐานสายเดี่ยวที่ประกอบด้วยกรดอะมิโน 58 ตัวที่เหลือ โดยมีพันธะไดซัลไฟด์ 3 ตัวเชื่อมโยงกันในสายโซ่ เป็นเวลานานที่ aprotinn ถูกนำมาใช้ในการรักษาโรคตับอ่อนอักเสบเฉียบพลัน หลังทศวรรษปี 1990 อะโปรตินน์ชนิดรีคอมบิแนนท์เริ่มถูกนำมาใช้ในการผ่าตัดหัวใจและทรวงอกเพื่อป้องกันเกล็ดเลือด ลดเลือดออกและของเหลวไหลออก และสำหรับการรักษาทางคลินิกของผู้ป่วยที่มีความผิดปกติของการแข็งตัวของเลือด ดังนั้นขนาดตลาดของ aprotinn จึงขยายตัวอย่างรวดเร็วและกลายเป็นหนึ่งในยาชีวเคมีที่สำคัญ
สังเคราะห์
ปัจจุบัน สารเตรียมอะโปรตินน์ชนิดรีคอมบิแนนท์ที่มีจำหน่ายในท้องตลาดส่วนใหญ่เป็นสารสกัดจากอวัยวะ เช่น ปอดของวัว ซึ่งมีกระบวนการที่ซับซ้อนและมีค่าใช้จ่ายสูง ดังนั้นจึงมีความสำคัญอย่างยิ่งในการสำรวจการผลิต aprotinn ชนิดรีคอมบิแนนท์โดยใช้วิธีการทางพันธุวิศวกรรม
เมื่อใช้ระบบการแสดงออกการหลั่ง โดยทั่วไปการผลิตอะโปรตินจะต่ำ และกิจกรรมของผลิตภัณฑ์ที่ได้ก็ต่ำเช่นกัน โดยผ่านการแสดงออกแบบฟิวชัน คาดว่าจะเพิ่มระดับการแสดงออกของรีคอมบิแนนท์อะโปรตินน์อย่างมาก พลาสมิดการแสดงออกของ aprotinn ชนิดรีคอมบิแนนท์ pGrxA BPTI ถูกสร้างขึ้นเพื่อจุดประสงค์นี้ และไซต์การจดจำสำหรับ FXa ได้รับการออกแบบระหว่างคู่ฟิวชันและ aprotinn ชนิดรีคอมบิแนนท์ หลังจากถูกแสดงออกมาในรูปแบบของส่วนประกอบของการรวมเข้า คู่ฟิวชันถูกทำให้บริสุทธิ์และพับซ้ำโดยการกรองด้วยเจล คู่ฟิวชันถูกตัดออกโดย FXa เพื่อให้ได้โปรตีนที่มีฤทธิ์เดียวกันกับผลิตภัณฑ์จากธรรมชาติ ด้วยการปรับเงื่อนไขการแสดงออกให้เหมาะสม ผลลัพธ์ได้รับการปรับปรุงอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับระบบการแสดงออกก่อนหน้านี้
ปลูกฝังแบคทีเรียหลอดกลีเซอรอลบนเพลตวุ้น LB/AMP เพาะเลี้ยงที่ 37 องศา เป็นเวลา 20 ชั่วโมง ขูดโคโลนีแล้วปลูกเชื้อลงในอาหารเหลว LB/AMP 5 มล. ที่ 37 องศา 200 รอบ/นาที และเพาะเลี้ยงข้ามคืน เพาะเชื้อ 5% ของหัวเชื้อลงในอาหารผสมสารละลายข้าวโพด 100 มล. เพาะเลี้ยงที่ 37 องศาและ 220 รอบ/นาทีบนเชคเกอร์ กระตุ้นเป็นเวลา 7 ชั่วโมง จากนั้นหมุนเหวี่ยง (8000 รอบ/นาที 5 นาที 4 องศา ) เพื่อรวบรวม เซลล์แบคทีเรีย ชั่งน้ำหนักน้ำหนักเปียกของเซลล์แบคทีเรียและตรวจจับการแสดงออกของเซลล์ด้วย SDS-PAGE 15%
ใช้ถังหมัก German Biostat 30 L ที่อุณหภูมิ 37 องศา โดยมีการควบคุมออกซิเจนละลายน้ำที่ 20% pH 7.0 การใช้ถังหมักเพื่อแสดงฟิวชันโปรตีน จะได้เซลล์แบคทีเรียเปียก 260 กรัมจากน้ำซุปหมัก 16 ลิตร หรือประมาณ 16 กรัม/ลิตร ระดับการแสดงออกประมาณ 45%
หลังจากการเพาะเลี้ยงเสร็จสิ้น ให้รวบรวมเซลล์แบคทีเรีย เติมเซลล์แบคทีเรีย 1 กรัมลงในสารละลาย A 10 มล. (Tris HCl 50 มิลลิโมล/ลิตร, pH 8.0, EDTA 1 มิลลิโมล/ลิตร) พักเซลล์เหล่านั้นไว้อย่างทั่วถึง โซนิคเซลล์ในอ่างน้ำแข็ง ทำงาน 30 วินาที ช่วงเวลา 10 วินาที กำลัง 400 วัตต์ 30 รอบ ถ่ายของเหลวลงในหลอดสำหรับการหมุนเหวี่ยง หมุนเหวี่ยงที่ 4 องศาและ 8000 รอบ/นาที เป็นเวลา 15 นาที และตะกอนคือส่วนรวมสารดิบ
ล้างส่วนที่รวมสารดิบด้วยสารละลาย B (50 มิลลิโมล/ลิตร ทริส HCl, pH 8.0, EDTA 1 มิลลิโมล/ลิตร, 1% ไทรทัน-X100) สองครั้ง แต่ละครั้งเป็นเวลา 0.5 ชั่วโมง ปั่นแยกเพื่อเอาส่วนเหนือตะกอนออก และได้รับเนื้อสารที่รวมค่อนข้างบริสุทธิ์ เติมตัวรวม 1 กรัมลงในสารละลาย C 5 มล. (Tris HCl 50 มิลลิโมล/ลิตร, pH 8.0, ยูเรีย 8 โมล/ลิตร, EDTA 1 มิลลิโมล/ลิตร, DTT 5 มิลลิโมล/ลิตร) บ่มข้ามคืนที่ 4 องศา เปลี่ยนสภาพและ ละลาย ปั่นเหวี่ยงที่ 12000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 15 นาที และรวบรวมส่วนลอยเหนือตะกอนเพื่อให้ได้สารละลายการละลายของตัวรวม รับ aprotinn ชนิดรีคอมบิแนนท์
ผลทางเภสัชวิทยา:
อะโปรตินินยับยั้งทริปซินของมนุษย์ เอนไซม์ละลายลิ่มเลือด พลาสมา และแอนจิโอเทนซินในเนื้อเยื่อ ผ่านทางคอมเพล็กซ์ตัวยับยั้งเอนไซม์แบบพลิกกลับได้ที่เกิดขึ้นในอัตราส่วนทางเคมีที่แน่นอน โปรตีเอสที่มีฤทธิ์ซีรีนมีบทบาทสำคัญในระบบวาโซเพรสซิน ไคนิโนเจน ไคนิน ระบบเสริม และระบบการแข็งตัวของเลือด โดยที่พลาสมินและพลาสมาวาโซเพรสซินมีบทบาทสำคัญ
Aprotinn มีฤทธิ์ยับยั้งโดยการสร้าง aprotinn protease complex ผ่านส่วนที่ใช้งานของซีรีนในเอนไซม์ อย่างไรก็ตาม เมื่อรวมกับโปรตีเอสที่แตกต่างกัน มันแสดงค่าคงที่การแยกตัวที่แตกต่างกัน การจับกับทริปซินนั้นรุนแรงที่สุด (Ki=0.06nmoN) ซึ่งเป็นหนึ่งในค่าคงที่ต่ำสุดที่รายงานในการโต้ตอบระหว่างโปรตีนและโปรตีน (Laydunski et al. 1974) การจับกับเอนไซม์ละลายลิ่มเลือดของมนุษย์ไม่รุนแรงมาก เนื่องจากค่า K สูงของสารยับยั้งเอนไซม์เชิงซ้อน (Ki=1 nmoN) จึงสามารถย้อนกลับได้ (Wimann, 1980) และสารเชิงซ้อนที่จับกับแอนจิโอเทนซินในพลาสมาของมนุษย์ค่อนข้างอ่อนแอ (Ki=30 nmol/l) แต่ยังอยู่ในช่วงการรักษาของ aprotinn (Nakahara, 1983)
Aprotinn ไม่เพียงแต่จับกับโมเลกุลของเอนไซม์อิสระเท่านั้น แต่ยังจับกับเอนไซม์ที่จับกับส่วนประกอบที่สามอยู่แล้วด้วย (หากศูนย์กลางที่แอคทีฟของเอนไซม์ยังคงมีความสามารถในการจับกัน) ดังนั้น aprotinn จึงยับยั้งเอนไซม์ละลายลิ่มเลือดอิสระและยังสามารถยับยั้งคอมเพล็กซ์ไคเนสของสายโซ่ไฟบริโนไลซินระดับกลางที่เกิดขึ้นในระหว่างการรักษาด้วยลิ่มเลือดอุดตันด้วยไคเนสโซ่ (Wimann, 1980)
ฤทธิ์ต้านการละลายลิ่มเลือดของ aprotinn ขึ้นอยู่กับการยับยั้งพลาสมินที่ถูกกระตุ้นโดยการไฮโดรไลซิสของโปรตีน แตกต่างจากตัวทำละลายต้านการละลายลิ่มเลือดสังเคราะห์ เนื่องจากการยับยั้งโดยตรงของพลาสมินที่ถูกกระตุ้นมากเกินไป aprotinn ไม่เพียงแต่ปกป้องสารตั้งต้นโดยตรง (ไฟบริน) จากการย่อยสลายโดยพลาสมิน แต่ยังปกป้องไฟบริโนเจน แฟคเตอร์ V และ VIII ในพลาสมา และอัลฟา 2-โกลบูลินด้วย ในเซรั่ม
ในการทดลองการช็อกที่เกิดจากเอนโดท็อกซินและการช็อกจากภาวะ hypovolemic Trasylol สามารถยับยั้งการกระตุ้นการทำงานของ kininogen ได้อย่างมีนัยสำคัญ (พิธีมิสซา และ a1.1972)
Trasylol สามารถป้องกันหรือชะลอการเกิดอาการบวมน้ำที่ปอด (ช็อกปอด) ผลการยับยั้งขึ้นอยู่กับขนาดยาและขึ้นอยู่กับเวลา (Lorthioir et al., 1973)
ในระหว่างการช็อก ตับอ่อนขาดเลือดสามารถผลิตสารเปปไทด์ที่เป็นพิษสูง ได้แก่ ปัจจัยยับยั้งกล้ามเนื้อหัวใจตาย (MDF) ปัจจัยนี้เกี่ยวข้องอย่างใกล้ชิดกับการเสียชีวิตจากอาการช็อก MDF สามารถตรวจพบได้ในพลาสมาของหนู สุนัข ลิง และมนุษย์ที่มีภาวะเลือดออก ติดเชื้อ ช็อกจากโรคหัวใจ และช็อกจากการเผาไหม้ MDF อาจทำให้การหดตัวของกล้ามเนื้อหัวใจลดลงในทุกกรณีที่มีเลือดออก และในขณะเดียวกันก็ทำให้เกิดการหดตัวของหลอดเลือดต้านทานอวัยวะภายใน ทำให้เกิดภาวะขาดเลือดเฉพาะที่และการผลิต MDF มากขึ้น นอกจากนี้ เนื่องจากความเสียหายที่เป็นพิษที่เกิดขึ้นกับระบบ reticuloendothelial ทำให้การกวาดล้างในกระแสเลือดล่าช้า Trasylol สามารถป้องกันการผลิต MDF ได้อย่างมาก (Lefer 1984)
เภสัชพลศาสตร์:
หลังจากฉีด Trasylol ทางหลอดเลือดดำ รูปแบบดั้งเดิมของอะโปรตินินแพร่กระจายอย่างรวดเร็วตลอดระยะนอกเซลล์ ส่งผลให้ความเข้มข้นของยาในเลือดลดลงอย่างรวดเร็ว (ครึ่งชีวิตประมาณ 23 นาที)
เมื่อการกระจายยาถึงสมดุล ครึ่งชีวิตของความเข้มข้นของยาในเลือดที่ลดลง 1-4 ชั่วโมงหลังการฉีดคือประมาณ 150 นาที ปริมาตรการกระจายหลัก (ห้องกลาง) อยู่ที่ประมาณ 30% ถึง 50% ของของเหลวในร่างกาย
หลังจากฉีดยาเข้าเส้นเลือดในขนาด 250,000 KIU/ชม. เป็นเวลา 24 ชั่วโมง ผู้ป่วยจะมีความเข้มข้นในพลาสมาคงที่ที่ 40-50 KIU/มล. ความเข้มข้นนี้เทียบเท่ากับประมาณ 1 μ โมล/ลิตร และเท่ากับความเข้มข้นปกติของอัลฟา 2-สารต้านการละลายลิ่มเลือดในพลาสมา
Aprotinn สะสมในไตและในเนื้อเยื่อกระดูกอ่อนในระดับน้อย การเพิ่มคุณค่าของไตเกิดจากการจับกันของ aprotinn กับขอบแปรงของเซลล์เยื่อบุผิวท่อส่วนใกล้เคียง และ aprotinn ยังเสริมสมรรถนะใน phagocytic lysosomes อีกด้วย เนื่องจากความสัมพันธ์ของอัลคาไลน์อะโปรตินกับโปรตีโอไกลแคนที่เป็นกรด จึงสะสมอยู่ในเนื้อเยื่อกระดูกอ่อน (Kaller, 1968)
การเพิ่มคุณค่าของ aprotinn ในไลโซโซม phagocytic ขึ้นอยู่กับกลไกการขนส่งของเซลล์เยื่อบุผิวท่อไตและดังนั้นยังขึ้นอยู่กับการทำงานของเซลล์ที่ไม่บุบสลายด้วย
ความเข้มข้นในปอด ม้าม และตับอ่อนใกล้เคียงกับความเข้มข้นในซีรั่ม ความเข้มข้นจะต่ำที่สุดในสมอง กล้ามเนื้อ กระเพาะอาหาร และลำไส้
Trasylol ไม่ได้เข้าสู่น้ำไขสันหลัง (CSF) จริงๆ ตรวจไม่พบ Trasylol ในน้ำไขสันหลังของสุนัข หนูตะเภา อาสาสมัครที่มีสุขภาพดี หรือผู้ป่วยที่มีการติดเชื้อทางระบบประสาทหรือไม่ก็ได้
Trasylol ในปริมาณที่จำกัดมากเท่านั้นที่สามารถผ่านสิ่งกีดขวางรกได้ หลังจากฉีดเข้าเส้นเลือดดำก่อนคลอดบุตร ความเข้มข้นของเลือดในทารกแรกเกิดคือ 1/10 ของความเข้มข้นของเลือดในมารดา และนักวิจัยคนอื่นๆ ไม่พบ aprotinn ในเลือดของทารกในครรภ์ของมารดาที่ได้รับการฉีด Trasylol แล้ว รกอาจไม่สามารถซึมผ่านไปยัง Trasylol ได้อย่างสมบูรณ์ แต่การผ่านของรกนั้นเห็นได้ชัดว่าเป็นกระบวนการที่ช้ามาก
การศึกษาในหลอดทดลองได้แสดงให้เห็นว่า
อะโปรตินินเนื่องจากเป็นสารประกอบโมเลกุลขนาดเล็กที่ต้านทานการละลายลิ่มเลือด จึงมีคุณสมบัติยับยั้งเอนไซม์ที่มีนัยสำคัญและจำเพาะ ไม่เพียงแต่ยับยั้งการทำงานของทริปซินได้อย่างมีประสิทธิภาพเท่านั้น แต่ยังออกฤทธิ์อย่างกว้างขวางกับเอนไซม์โปรตีโอไลติกอื่นๆ ที่เกี่ยวข้องด้วย จึงมีบทบาทสำคัญในการทดลองทางชีววิทยาของเซลล์ โดยเฉพาะอย่างยิ่งในระหว่างการสลายเซลล์และเนื้อเยื่อและการทำให้เป็นเนื้อเดียวกัน Aprotinn สามารถทำหน้าที่เป็นตัวยับยั้งโปรตีเอสที่มีประสิทธิภาพ โดยป้องกันการย่อยสลายโปรตีนเป้าหมายโดยไม่ได้ตั้งใจ ซึ่งมีความสำคัญอย่างยิ่งต่อการรักษาความสมบูรณ์และความแม่นยำของตัวอย่าง
ผลการยับยั้งของ Aprotinn แสดงให้เห็นถึงการพึ่งพาปริมาณที่ชัดเจน นั่นคือเมื่อความเข้มข้นเพิ่มขึ้น ผลการยับยั้งต่อกิจกรรมละลายลิ่มเลือดก็เพิ่มขึ้นตามไปด้วย คุณลักษณะนี้ช่วยให้นักวิจัยควบคุมเงื่อนไขการทดลองได้แม่นยำยิ่งขึ้น เพื่อให้ได้ผลการทดลองที่เชื่อถือได้และทำซ้ำได้มากขึ้น ในขณะเดียวกัน Aprotinn ยังสามารถยืดระยะเวลาการแข็งตัวของเลือด ซึ่งเป็นการยืนยันบทบาทที่สำคัญในกลไกการแข็งตัวของเลือดอีกด้วย การทดลองในหลอดทดลองแสดงให้เห็นว่า Aprotinn เป็นตัวยับยั้งวิถีการแข็งตัวของเลือดภายนอกที่มีประสิทธิภาพ ซึ่งสามารถแทรกแซงและควบคุมกระบวนการสำคัญในกระบวนการแข็งตัวของเลือดได้
การวิจัยในวิฟ
Aprotini ยังแสดงให้เห็นถึงผลทางเภสัชวิทยาที่เป็นเอกลักษณ์อีกด้วย สามารถยับยั้งกระบวนการละลายลิ่มเลือดในหลอดทดลองได้อย่างมีนัยสำคัญ ยืดระยะเวลาการตกเลือดบริเวณหางในหนู และยืดเวลาการแข็งตัวของเลือดในพลาสมาของมนุษย์ การค้นพบนี้ชี้ให้เห็นว่า Aprotinn อาจมีฤทธิ์ต้านเลือดออกและป้องกันลิ่มเลือดอุดตันได้ เพื่อตรวจสอบยืนยันผลกระทบในร่างกายเพิ่มเติม นักวิจัยได้ทำการทดลองในรูปแบบการลัดวงจรของหลอดเลือดแดงและดำในหนู ผลการวิจัยพบว่า Aprotnin สามารถลดน้ำหนักของลิ่มเลือดได้อย่างมีนัยสำคัญ และยังสนับสนุนศักยภาพของยานี้ในการเป็นยาต้านลิ่มเลือดอีกด้วย
โดยสรุป Aprotnin ซึ่งเป็นสารประกอบโมเลกุลขนาดเล็กที่ยับยั้งการละลายลิ่มเลือด ได้แสดงให้เห็นคุณสมบัติในการยับยั้งเอนไซม์ที่มีนัยสำคัญและผลทางเภสัชวิทยาทั้ง ในหลอดทดลอง และ ในร่างกาย การประยุกต์ใช้ในการทดลองทางชีววิทยาของเซลล์ช่วยให้นักวิจัยมีเครื่องมืออันทรงพลัง ในขณะที่การค้นพบในการศึกษาในสัตว์ทดลองให้เบาะแสที่สำคัญและเป็นพื้นฐานสำหรับการพัฒนาเป็นยาต้านเลือดออกและยาต้านลิ่มเลือดอุดตัน ในอนาคต ด้วยการวิจัยเพิ่มเติมเกี่ยวกับกลไกการออกฤทธิ์ของ Aprotnin และการทดลองทางคลินิก เราคาดว่าจะเห็นการนำไปใช้ในวงกว้างมากขึ้นในวงการแพทย์
ป้ายกำกับยอดนิยม: อะโปรตินิน cas 9087-70-1 ซัพพลายเออร์ ผู้ผลิต โรงงาน ขายส่ง ซื้อ ราคา จำนวนมาก ขาย