รีทาทรูไทด์(ลิงค์:https://www.bloomtechz.com/synthetic-chemical/peptide/retutrutide-powder-cas-2381089-83-2.html) เป็นตัวเร่งปฏิกิริยาโพลีเปปไทด์ GLP-1R/GIPR/GCGR ที่ออกฤทธิ์ยาวสังเคราะห์ทางเคมี ซึ่งมีจุดมุ่งหมายสำหรับการรักษาโรคเบาหวานประเภท 2 ในผู้ใหญ่ การควบคุมน้ำหนัก และไขมันสะสมในตับที่ไม่มีแอลกอฮอล์/ไขมันพอกตับอักเสบที่ไม่มีแอลกอฮอล์ ข้อบ่งใช้สำหรับโรคเบาหวานประเภท 2 ในผู้ใหญ่ของผลิตภัณฑ์นี้ได้รับการอนุมัติให้ใช้ทางคลินิกเมื่อวันที่ 29 สิงหาคม 2023 นอกจากนี้ การยื่นขอขึ้นทะเบียนข้อบ่งชี้ทางคลินิกสำหรับโรคไขมันพอกตับที่ไม่มีแอลกอฮอล์/ไขมันพอกตับที่ไม่มีแอลกอฮอล์ยังอยู่ในขั้นตอนการตรวจสอบขั้นสุดท้าย มีตัวดำเนินการ GLP-1R/GIPR/GCGR จำนวน 8 ตัวที่อยู่ระหว่างการพัฒนาในโลก ซึ่ง Retatrutide ของ Rita มีความก้าวหน้าเร็วที่สุด และเปิดตัวการทดลองทางคลินิกระยะที่ 3 ในเดือนมิถุนายนปีนี้ ในเดือนเดียวกันนั้น Rita ประกาศว่าข้อมูลการวิจัยระยะที่สองของ Retatrutide ได้รับการเผยแพร่ในการประชุมประจำปีของ ADA โดยแสดงให้เห็นว่าใน 24 สัปดาห์ Retatrutide (1 มก., 4 มก., 8 มก. หรือ 12 มก.) ถึงจุดสิ้นสุดหลักของประสิทธิภาพ การประเมินผู้เข้าร่วมที่เป็นโรคอ้วนหรือมีน้ำหนักเกินโดยไม่มีโรคเบาหวาน โดยมีการลดน้ำหนักเฉลี่ย 17.5% ในบรรดาจุดยุติรอง น้ำหนักลดลงโดยเฉลี่ย 24.2% เมื่อสิ้นสุดการรักษา 48 สัปดาห์ เรายังสังเคราะห์เปปไทด์ในห้องปฏิบัติการตามวิธีการที่เผยแพร่อีกด้วย วิธีการสังเคราะห์เฉพาะจะมีการอธิบายโดยย่อ และสามารถส่งขั้นตอนเฉพาะให้เราทางอีเมลได้
วิธีที่ 1:
ขั้นตอนโดยละเอียดสำหรับการสังเคราะห์เรทารูไทด์โดยใช้การสังเคราะห์โซลิดสเตตในห้องปฏิบัติการมีดังต่อไปนี้:
เตรียมรีเอเจนต์และเครื่องมือที่จำเป็น: รวมถึงกรดอะมิโน, ไดคลอโรมีเทน, โพแทสเซียมคาร์บอเนต, ซิลิกาเจลเอทอกซีเลต, อะซีโตไนไตรล์, ไพริดีน, เอ็น-เมทิลมอร์โฟลีน, แหล่งไดไอโซโพรพิลเอทิลคลอไรด์, กรดไตรฟลูออโรอะซิติก, DIPEA, กรดอะมิโนที่ได้รับการปกป้องด้วย Boc และรีเอเจนต์อื่นๆ รวมถึงเครื่องกวนแม่เหล็ก , เครื่องระเหยแบบหมุน และเครื่องมืออื่นๆ
(1) การสังเคราะห์กรดอะมิโนที่ป้องกันด้วย Boc: ละลายกรดอะมิโนที่ต้องการในไดคลอโรมีเทน เติมผงโพแทสเซียมคาร์บอเนต คนให้เข้ากัน เติมซิลิกาเจลที่เติมเอทอกซีเลต กวนต่อไป จากนั้นเติมไพริดีนและ N-เมทิลมอร์โฟลีน เพื่อให้ได้กรดอะมิโนที่ป้องกันด้วย Boc
(2) การสังเคราะห์เฟสของแข็ง: ผสมอะซีโตไนไตรล์ แหล่งไดไอโซโพรพิลเอทิลคลอไรด์ และกรดไตรฟลูออโรอะซิติกเข้าด้วยกัน คนให้เข้ากัน เติมกรดอะมิโนที่ป้องกันด้วย Boc ที่เตรียมไว้ แล้วคนต่อไปเพื่อให้ได้ผลิตภัณฑ์การสังเคราะห์เฟสของแข็ง
(3) กลุ่มการป้องกัน: ละลายการสังเคราะห์เฟสของแข็งในไดคลอโรมีเทน เติมกรดไตรฟลูออโรอะซิติก คนให้เข้ากัน แล้วเติม DIPEA กวนต่อไปเพื่อให้ได้การสังเคราะห์เฟสของแข็งที่ถูกปลดการป้องกันแล้ว
(4) การทำให้บริสุทธิ์: ละลายการสังเคราะห์เฟสของแข็งที่ถูกปลดการป้องกันในน้ำ ปรับ pH ไปที่ประมาณ 9.0 ด้วยสารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด์ จากนั้นปรับ pH ไปที่ประมาณ 5.0 ด้วยกรดอะซิติก และสุดท้าย ตกตะกอนผลิตภัณฑ์บริสุทธิ์ด้วยอีเทอร์
วิธีที่ 2:
ขั้นตอนโดยละเอียดสำหรับการสังเคราะห์เรทารูไทด์โดยใช้การสังเคราะห์เฟสของเหลวในห้องปฏิบัติการมีดังต่อไปนี้:
เตรียมรีเอเจนต์และเครื่องมือที่จำเป็น: รวมถึงอาร์จินีน, ไกลซีน, อะซิติกแอนไฮไดรด์, ไตรเอทิลเอมีน, โพแทสเซียมคาร์บอเนต, ไดคลอโรมีเทน, เมทานอล, ไพริดีน, เอ็น-เมทิลมอร์โฟลีน, อะซิติกแอนไฮไดรด์, โซเดียมอะซิเตต และรีเอเจนต์อื่นๆ รวมถึงเครื่องมือ เช่น เครื่องกวน, กรวยแยก ปั๊มสุญญากาศ เตาอบ และคอลัมน์โครมาโตกราฟี
(1) ละลายอาร์จินีนและไกลซีนในปริมาณที่เหมาะสมของไดคลอโรมีเทน เติมอะซิติกแอนไฮไดรด์และไตรเอทิลเอมีนในปริมาณที่เหมาะสม และคนให้เข้ากันโดยใช้เครื่องคน
(2) ย้ายของผสมที่ละลายแล้วไปอบในเตาอบและให้ความร้อนที่ 80 องศา C เป็นเวลา 1 ชั่วโมงเพื่อให้อะซิติเลตกรดอะมิโนที่ตกค้าง
(3) ทำให้สารละลายที่ทำปฏิกิริยาเป็นกลางด้วยผงโพแทสเซียมคาร์บอเนตเพื่อทำให้กรดอะซิติกเป็นกลางในสารละลายเพื่อสร้างโซเดียมอะซิเตต จากนั้นจึงแยกเปปไทด์ที่สร้างขึ้นด้วยไดคลอโรมีเทน
(4) ล้างสารละลายเปปไทด์ที่สกัดด้วยเมทานอลและกรองด้วยปั๊มสุญญากาศเพื่อให้ได้เปปไทด์ดิบ
(5) ละลายเปปไทด์ดิบในปริมาณที่เหมาะสมของไพริดีนและเอ็น-เมทิลมอร์โฟลีน เติมอะซิติกแอนไฮไดรด์และโซเดียมอะซิเตตในปริมาณที่เหมาะสม และคนให้เข้ากันโดยใช้เครื่องกวน
(5) กรองสารละลายที่เกิดปฏิกิริยาด้วยปั๊มสุญญากาศ ล้างเค้กกรองด้วยเมทานอล แล้วกรองด้วยปั๊มสุญญากาศเพื่อให้ได้เรสตารูไทด์ขั้นสุดท้าย
วิธีที่ 3:
ขั้นตอนโดยละเอียดสำหรับการสังเคราะห์รีทารูไทด์โดยใช้วิธีทางเคมีในห้องปฏิบัติการมีดังนี้:
เตรียมรีเอเจนต์และเครื่องมือที่จำเป็น: รวมถึงอาร์จินีน, ไกลซีน, อะซิติกแอนไฮไดรด์, ไตรเอทิลเอมีน, โพแทสเซียมคาร์บอเนต, ไดคลอโรมีเทน, เมทานอล, ไพริดีน, เอ็น-เมทิลมอร์โฟลีน, อะซิติกแอนไฮไดรด์, โซเดียมอะซิเตต และรีเอเจนต์อื่นๆ รวมถึงเครื่องมือ เช่น เครื่องกวน, กรวยแยก ปั๊มสุญญากาศ เตาอบ และคอลัมน์โครมาโตกราฟี
(1) ละลายอาร์จินีนและไกลซีนในปริมาณที่เหมาะสมของไดคลอโรมีเทน เติมอะซิติกแอนไฮไดรด์และไตรเอทิลเอมีนในปริมาณที่เหมาะสม และคนให้เข้ากันโดยใช้เครื่องคน
(2) ย้ายของผสมที่ละลายแล้วไปอบในเตาอบและให้ความร้อนที่ 80 องศา C เป็นเวลา 1 ชั่วโมงเพื่อให้อะซิติเลตกรดอะมิโนที่ตกค้าง
(3) ทำให้สารละลายที่ทำปฏิกิริยาเป็นกลางด้วยผงโพแทสเซียมคาร์บอเนตเพื่อทำให้กรดอะซิติกเป็นกลางในสารละลายเพื่อสร้างโซเดียมอะซิเตต จากนั้นจึงแยกเปปไทด์ที่สร้างขึ้นด้วยไดคลอโรมีเทน
(4) ล้างสารละลายเปปไทด์ที่สกัดด้วยเมทานอลและกรองด้วยปั๊มสุญญากาศเพื่อให้ได้เปปไทด์ดิบ
(5) ละลายเปปไทด์ดิบในปริมาณที่เหมาะสมของไพริดีนและเอ็น-เมทิลมอร์โฟลีน เติมอะซิติกแอนไฮไดรด์และโซเดียมอะซิเตตในปริมาณที่เหมาะสม และคนให้เข้ากันโดยใช้เครื่องกวน
(6) กรองสารละลายที่เกิดปฏิกิริยาด้วยปั๊มสุญญากาศ ล้างเค้กกรองด้วยเมทานอล แล้วกรองด้วยปั๊มสุญญากาศเพื่อให้ได้ Restarutide สุดท้าย
จำเป็นต้องมีปฏิกิริยาการสังเคราะห์สารอินทรีย์หลายอย่างเพื่อให้ได้โมเลกุลเป้าหมาย นอกจากนี้ วิธีการนี้ใช้รีเอเจนต์อินทรีย์หลายชนิดและสภาวะการทำงานที่ซับซ้อน ดังนั้นการสังเคราะห์ทางเคมีของโรทารูไทด์ในห้องปฏิบัติการมักจะไม่เหมาะสำหรับการผลิตขนาดใหญ่หรือการใช้งานทางอุตสาหกรรม สำหรับการผลิตขนาดใหญ่หรือการใช้งานทางอุตสาหกรรม วิธีที่นิยมใช้กันมากกว่าคือการเตรียมโรทารูไทด์ด้วยวิธีสังเคราะห์ เช่น การสังเคราะห์ทางชีวภาพหรือการสังเคราะห์เฟสของเหลว ซึ่งมีขนาดค่อนข้างเล็กในระดับห้องปฏิบัติการ ใช้งานได้ค่อนข้างง่าย และเหมาะสำหรับการเตรียมผลิตภัณฑ์ในปริมาณน้อย . รีทารูไทด์ที่ได้จากวิธีการเหล่านี้มีความคล้ายคลึงหรือคล้ายกันในด้านโครงสร้างและกิจกรรมทางชีวภาพกับรีทารูไทด์ที่สังเคราะห์โดยวิธีทางเคมี แต่มีข้อดีคือให้ผลผลิตสูงกว่าและเตรียมง่ายกว่า ในเวลาเดียวกัน พวกเขายังมีศักยภาพในอุตสาหกรรมที่ดีขึ้นและโอกาสในการใช้งานที่กว้างขึ้น
วิธีที่ 4:
ขั้นตอนโดยละเอียดสำหรับการสังเคราะห์เรทารูไทด์โดยใช้วิธีทางชีวภาพในห้องปฏิบัติการมีดังต่อไปนี้:
การเตรียมยีนและรีเอเจนต์ที่ต้องการ: รับพลาสมิดที่มียีน Retatrutide จากคลังยีน เปลี่ยนพลาสมิดด้วยเซลล์ผู้รับ (เช่น Escherichia coli) และรับแบคทีเรียเชิงวิศวกรรมที่มียีน Retatrutide
(1) การเพาะเลี้ยงแบคทีเรียเชิงวิศวกรรม: ภายใต้อุณหภูมิ อุณหภูมิ pH และสภาวะความเข้มข้นของไอออนที่เหมาะสม ให้ใช้อาหารเลี้ยงเชื้อเพื่อเพาะเลี้ยงแบคทีเรียเชิงวิศวกรรม เพื่อให้พวกมันแพร่กระจายในปริมาณมาก
(2) การสกัด Retarutide: แบคทีเรียวิศวกรรมที่เพาะเลี้ยงจะถูกบดโดยใช้เครื่องบด และชิ้นส่วนของเซลล์จะถูกแยกออกจาก Retarutide โดยใช้วิธีต่างๆ เช่น การกรองแบบอัลตราฟิลเตรชันและการตกตะกอน เพื่อให้ได้ผลิตภัณฑ์น้ำมันดิบ
(3) การทำให้บริสุทธิ์ของ Retarutide: Retarutide ดิบถูกทำให้บริสุทธิ์โดยใช้เทคโนโลยีโครมาโทกราฟีเพื่อให้ได้ Retarutide ที่มีความบริสุทธิ์สูง
การตรวจจับและระบุโรทารูไทด์: ใช้โครมาโทกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง แมสสเปกโตรเมทรี รีโซแนนซ์แม่เหล็กนิวเคลียร์ และเทคนิคอื่นๆ เพื่อตรวจจับและระบุโครงสร้างของโรทารูไทด์ที่บริสุทธิ์
สมการปฏิกิริยาทางเคมีสำหรับการสังเคราะห์รีทารูไทด์ทางชีววิทยาในห้องปฏิบัติการส่วนใหญ่เกี่ยวข้องกับปฏิกิริยาทางเคมีในระหว่างกระบวนการแสดงออกของยีน ซึ่งรวมถึงสองขั้นตอน: การถอดความและการแปลความหมาย
การถอดความ: DNA แบบเกลียวคู่เปิดออก โดยใช้หนึ่งเกลียวเป็นแม่แบบในการสังเคราะห์เกลียว RNA ซึ่งต้องอาศัยการมีส่วนร่วมของ RNA polymerase สมการปฏิกิริยามีดังนี้:
DNA แบบเกลียวคู่: DNApol → mRNA+DNApol
การแปล: ไรโบโซมจับกับ mRNA เพื่อสังเคราะห์สายเปปไทด์ ซึ่งเป็นกระบวนการที่ต้องใช้กรดอะมิโนและพลังงานร่วมกัน สมการปฏิกิริยามีดังนี้:
ไรโบโซม+mRNA → สายโซ่เปปไทด์+GDP+Pi+H2O
สายโซ่เปปไทด์+ATP → สายโซ่เปปไทด์+AMP+PPi
ในหมู่พวกเขา DNApol เป็นตัวแทนของ DNA polymerase; MRNA แสดงถึง Messenger RNA; ไรโบโซมเป็นตัวแทนของไรโบโซม โซ่เปปไทด์เป็นตัวแทนของโซ่โพลีเปปไทด์ GDP แสดงถึงกัวโนซีนไดฟอสเฟต Pi แสดงถึงกรดฟอสฟอริกอนินทรีย์ H2O แสดงถึงน้ำ ATP แสดงถึงอะดีโนซีนไตรฟอสเฟต AMP แสดงถึงอะดีโนซีนโมโนฟอสเฟต PPi แสดงถึงไพโรฟอสเฟตอนินทรีย์ ปฏิกิริยาเหล่านี้ทำให้เกิดสายเปปไทด์ที่จำเป็นสำหรับการสังเคราะห์รีทารูไทด์ ซึ่งจากนั้นจะถูกนำไปแปรรูปและแก้ไขในขั้นตอนต่อมาเพื่อให้ได้รีทารูไทด์
ข้างต้นเป็นวิธีการทั่วไปสำหรับการสังเคราะห์โรทารูไทด์ในห้องปฏิบัติการ ซึ่งแต่ละวิธีมีข้อดี ข้อเสีย และขอบเขตการใช้งานที่แตกต่างกัน ห้องปฏิบัติการมักจะใช้วิธีการสังเคราะห์เฟสของเหลวและเฟสของแข็งสำหรับการผลิตขนาดเล็กเพื่อการวิจัยและการทดลอง ในทางกลับกัน การผลิตทางอุตสาหกรรมใช้การผสมผสานระหว่างการสังเคราะห์ทางชีวภาพและการผลิตเฟสของเหลว/ของแข็ง เพื่อการผลิตขนาดใหญ่เพื่อตอบสนองความต้องการของตลาด ควรสังเกตว่าวิธีการเหล่านี้จำเป็นต้องมีการปรับสภาพให้เหมาะสมและการควบคุมกระบวนการอย่างเข้มงวดเพื่อให้มั่นใจในคุณภาพและความบริสุทธิ์ของผลิตภัณฑ์ขั้นสุดท้าย