ผง IPTG (ไอโซโพรพิล β-D-1-ไทโอแลคโตไพราโนไซด์)เป็นตัวเหนี่ยวนำที่รู้จักกันดีและใช้กันอย่างแพร่หลายในอณูชีววิทยา โดยเฉพาะอย่างยิ่งในด้านการแสดงออกของโปรตีนรีคอมบิแนนท์ ในบล็อกนี้ เราจะเจาะลึกผลกระทบของผง IPTG ต่อการแสดงออกของโปรตีนที่มีความสามารถในการละลายต่ำในฐานะซัพพลายเออร์ผง IPTG โดยแบ่งปันข้อมูลเชิงลึกทางวิทยาศาสตร์และประสบการณ์เชิงปฏิบัติ

ผงไอพีทีจี
รหัสสินค้า: BM-2-5-133
ชื่อ: Iptg
หมายเลข CAS: 367-93-1
MF: C9H18O5S
เมกะวัตต์: 238.3
หมายเลข EINECS: 206-703-0
ตลาด: อินโดนีเซีย สหราชอาณาจักร นิวซีแลนด์ แคนาดา ฯลฯ
ผู้ผลิต: โรงงาน BLOOM TECH กวางโจว
บริการเทคโนโลยี: แผนก R&D-4
การจัดส่ง: การจัดส่งเป็นอีกชื่อหนึ่งที่ไม่มีสารเคมีที่ละเอียดอ่อน
เราจัดให้ผงไอพีทีจีโปรดดูเว็บไซต์ต่อไปนี้สำหรับรายละเอียดข้อมูลจำเพาะและข้อมูลผลิตภัณฑ์
ผลิตภัณฑ์:https://www.bloomtechz.com/synthetic-chemical/api-researching-only/iptg-powder-cas-367-93-1.html
ทำความเข้าใจเกี่ยวกับโปรตีนที่มีการละลายต่ำ
โปรตีนที่มีความสามารถในการละลายต่ำถือเป็นความท้าทายที่พบบ่อยในสาขาเทคโนโลยีชีวภาพ โปรตีนเหล่านี้มีแนวโน้มที่จะรวมตัวกันทั้งภายในเซลล์ระหว่างการแสดงออกหรือระหว่างกระบวนการทำให้บริสุทธิ์ การรวมกลุ่มสามารถเกิดจากปัจจัยต่างๆ เช่น การมีอยู่ของบริเวณที่ไม่ชอบน้ำในลำดับโปรตีน การพับที่ไม่ถูกต้อง หรือความเข้มข้นของโปรตีนเฉพาะที่สูง ความสามารถในการละลายของโปรตีนต่ำอาจทำให้ผลผลิตลดลง ความยากลำบากในการทำให้บริสุทธิ์ และอาจส่งผลกระทบต่อกิจกรรมทางชีวภาพของผลิตภัณฑ์ขั้นสุดท้าย
IPTG ทำงานอย่างไรในการแสดงออกของโปรตีน
IPTG เป็นอะนาล็อกสังเคราะห์ของแลคโตส ในบริบทของการแสดงออกของโปรตีน มันถูกใช้เพื่อกระตุ้นการแสดงออกของยีนภายใต้การควบคุมของโอเปอเรเตอร์ครั่ง ในแบคทีเรียเช่น E. coli แลคโอเปอรอนคือชุดของยีนที่เกี่ยวข้องกับการเผาผลาญแลคโตส เมื่อมีแลคโตส มันจะจับกับตัวอัดครั่ง ทำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงโครงสร้างที่ทำให้ RNA polymerase สามารถถ่ายทอดยีนในโอเปอรอนได้ IPTG เลียนแบบผลกระทบนี้ โดยจับกับตัวอัดครั่งและบรรเทาการกดขี่ ดังนั้น จึงเริ่มต้นการถอดรหัสยีนเป้าหมายและการสังเคราะห์โปรตีนในเวลาต่อมา
ผลของ IPTG ต่อโปรตีนที่มีความสามารถในการละลายต่ำ
ผลเชิงบวก
ระดับการแสดงออกที่เพิ่มขึ้น
ประโยชน์หลักประการหนึ่งของการใช้ IPTG คือสามารถเพิ่มการแสดงออกของโปรตีนเป้าหมายได้อย่างมาก สำหรับโปรตีนที่มีความสามารถในการละลายต่ำ ระดับการแสดงออกที่สูงขึ้นอาจดูเหมือนขัดกับสัญชาตญาณเนื่องจากอาจนำไปสู่การรวมตัวที่มากขึ้น อย่างไรก็ตาม ในบางกรณี การเพิ่มการควบคุมในการแสดงออกสามารถจัดหาวัสดุเพิ่มเติมสำหรับการทำให้บริสุทธิ์และการปรับให้เหมาะสมขั้นปลายน้ำ ตัวอย่างเช่น หากโปรตีนแสดงออกมาในระดับต่ำมาก ก็อาจเป็นเรื่องยากที่จะตรวจจับและทำให้บริสุทธิ์ เมื่อใช้ IPTG เพื่อเพิ่มการแสดงออก เราจะได้รับโปรตีนในปริมาณที่มากขึ้น ซึ่งสามารถนำไปผ่านกลยุทธ์การละลายได้
การควบคุมการแสดงออกที่ง่ายขึ้น
IPTG ช่วยให้ควบคุมการแสดงออกของโปรตีนได้อย่างแม่นยำ เราสามารถปรับความเข้มข้นของ IPTG เพื่อควบคุมอัตราการสังเคราะห์โปรตีนได้ นี่เป็นสิ่งสำคัญสำหรับโปรตีนที่มีความสามารถในการละลายต่ำ เนื่องจากอัตราการแสดงออกที่ช้าและควบคุมได้อาจทำให้โปรตีนมีเวลามากขึ้นในการพับอย่างถูกต้อง ซึ่งจะช่วยลดโอกาสที่จะรวมตัวกัน ตัวอย่างเช่น การใช้ IPTG ที่มีความเข้มข้นต่ำลงอาจส่งผลให้มีการแสดงออกของโปรตีนทีละน้อยมากขึ้น ส่งผลให้กลไกการพับเซลล์สามารถติดตามการสังเคราะห์ได้
ผลกระทบเชิงลบ
การรวมกลุ่ม: ข้อเสียเปรียบหลักประการหนึ่งของการใช้ IPTG สำหรับโปรตีนที่ละลายได้ต่ำคือความเสี่ยงที่เพิ่มขึ้นของการรวมตัว เมื่อ IPTG กระตุ้นการแสดงออกในระดับสูง เซลล์อาจไม่สามารถจัดการกับโปรตีนที่สังเคราะห์ใหม่จำนวนมากได้ โปรตีนอาจสะสมในเซลล์เร็วกว่าที่สามารถพับได้อย่างถูกต้อง นำไปสู่การก่อตัวของส่วนที่รวมอยู่ ส่วนรวมคือมวลรวมที่ไม่ละลายน้ำของโปรตีนที่พับผิด ซึ่งอาจเป็นเรื่องยากที่จะละลายและพับกลับเป็นรูปแบบที่ออกฤทธิ์ของพวกมัน
ความเครียดระดับเซลล์: การแสดงออกในระดับสูงที่เกิดจาก IPTG อาจทำให้เกิดความเครียดของเซลล์ได้เช่นกัน เซลล์จะต้องเปลี่ยนทรัพยากรจำนวนมากไปสู่การสังเคราะห์โปรตีน ซึ่งอาจส่งผลต่อกระบวนการอื่นๆ ของเซลล์ ความเครียดนี้สามารถนำไปสู่การมีชีวิตของเซลล์และคุณภาพโปรตีนโดยรวมลดลง สำหรับโปรตีนที่มีความสามารถในการละลายต่ำ ความเครียดที่เพิ่มเข้ามาอาจทำให้ปัญหาการรวมกลุ่มรุนแรงขึ้น
-
กลยุทธ์ในการบรรเทาผลกระทบด้านลบ
-
การเพิ่มประสิทธิภาพความเข้มข้นของ IPTG: ตามที่กล่าวไว้ข้างต้น การค้นหาความเข้มข้นของ IPTG ที่เหมาะสมเป็นสิ่งสำคัญ จากการดำเนินการทดลองไทเทรต เราสามารถระบุความเข้มข้นต่ำสุดของ IPTG ที่ยังช่วยให้สามารถแสดงออกโปรตีนได้อย่างเพียงพอ ซึ่งสามารถช่วยลดความเสี่ยงของการรวมตัวและความเครียดของเซลล์ได้ ตัวอย่างเช่น แทนที่จะใช้ IPTG 1 mM ที่แนะนำโดยทั่วไป เราสามารถทดสอบความเข้มข้นตั้งแต่ 0.01 mM ถึง 0.5 mM เพื่อค้นหาจุดที่เหมาะสม
การแสดงออกของพี่เลี้ยง: Chaperone คือโปรตีนที่ช่วยในการพับโปรตีนอื่นๆ การแสดงบทบาทพี่เลี้ยงร่วมกันพร้อมกับโปรตีนเป้าหมายที่มีความสามารถในการละลายต่ำสามารถช่วยปรับปรุงความสามารถในการละลายได้ ตัวอย่างเช่น GroEL และ GroES เป็นพี่เลี้ยงที่สามารถแสดงออกร่วมกันใน E. coli เพื่อช่วยในการพับโปรตีนรีคอมบิแนนท์
การเพิ่มประสิทธิภาพอุณหภูมิ: การลดอุณหภูมิระหว่างการแสดงออกของโปรตีนยังช่วยเพิ่มความสามารถในการละลายของโปรตีนที่ละลายน้ำได้ต่ำอีกด้วย ที่อุณหภูมิต่ำ อัตราการสังเคราะห์โปรตีนจะช้าลง ทำให้โปรตีนมีเวลามากขึ้นในการพับตัวอย่างถูกต้อง ตัวอย่างเช่น การแสดงโปรตีนที่ 16°C แทนที่ 37°C มาตรฐานสามารถลดการรวมกลุ่มได้อย่างมีนัยสำคัญ
-
ผลิตภัณฑ์ที่เกี่ยวข้องเพื่อการวิจัย
หากคุณมีส่วนร่วมในการวิจัยโปรตีน คุณอาจสนใจผลิตภัณฑ์อื่นๆ บ้างผงอะคริฟลาวีนเป็นสารเคมีสังเคราะห์ที่ใช้ในงานวิจัยต่างๆ สามารถใช้ในการศึกษาที่เกี่ยวข้องกับการย้อมสีเซลล์และเป็นสารต้านแบคทีเรียได้ผงอะนิราเซแทมเป็นอีกหนึ่งผลิตภัณฑ์ที่ได้รับการศึกษาถึงศักยภาพในการเพิ่มประสิทธิภาพการรับรู้ สามารถนำมาใช้ในการวิจัยทางประสาทวิทยาศาสตร์ได้ผงลูทีโอลิน CAS 491 - 70 - 3เป็นฟลาโวนอยด์ที่มีคุณสมบัติต้านอนุมูลอิสระและต้านการอักเสบและสามารถนำไปใช้ในการวิจัยทางชีวเคมีและเภสัชวิทยาได้
บทสรุปและการเรียกร้องให้ดำเนินการ
โดยสรุป ผง IPTG มีทั้งผลบวกและผลเสียต่อการแสดงออกของโปรตีนที่มีความสามารถในการละลายต่ำ แม้ว่าจะสามารถเพิ่มระดับการแสดงออกและเป็นวัสดุสำหรับการวิจัยได้มากขึ้น แต่ก็ยังเสี่ยงต่อการรวมตัวและความเครียดของเซลล์อีกด้วย ด้วยการปรับความเข้มข้นของ IPTG ให้เหมาะสม การแสดงออกร่วมกันของพี่เลี้ยง และการปรับอุณหภูมิของการแสดงออกอย่างระมัดระวัง เราสามารถบรรเทาผลกระทบด้านลบเหล่านี้ได้
ในฐานะซัพพลายเออร์ผง IPTG เรามุ่งมั่นที่จะนำเสนอผลิตภัณฑ์คุณภาพสูงเพื่อสนับสนุนการวิจัยของคุณ หากคุณสนใจที่จะซื้อผง IPTG หรือมีคำถามใดๆ เกี่ยวกับการประยุกต์ใช้ในการแสดงออกของโปรตีน โปรดติดต่อเราเพื่อขอหารือและจัดซื้อเพิ่มเติม เราหวังว่าจะได้ร่วมงานกับคุณเพื่อให้บรรลุเป้าหมายการวิจัยของคุณ
อ้างอิง
นักศึกษา เอฟดับบลิว (2548) การผลิตโปรตีนโดยการเหนี่ยวนำอัตโนมัติในการเพาะเลี้ยงแบบเขย่าที่มีความหนาแน่นสูง การแสดงออกและการทำให้บริสุทธิ์ของโปรตีน, 41(1), 207 - 234
เดอ มาร์โก, เอ. (2009) การเอาชนะความท้าทายของการแสดงออกของโปรตีนรีคอมบิแนนท์ใน Escherichia coli: การทบทวนความก้าวหน้าล่าสุดในการแสดงออกของโมเลกุลพี่เลี้ยง โรงงานเซลล์จุลินทรีย์, 8(1), 26.
Baneyx, F. และ Mujacic, M. (2004) การพับโปรตีนรีคอมบิแนนท์และการพับผิดใน Escherichia coli เทคโนโลยีชีวภาพธรรมชาติ, 22(11), 1399 - 1408.
